|
'''Thin Layer ChromatographyDunnelaagchromatografie''' (DLC of TLC, dunnelaagchromatografievan het Engelse ''Thin Layer Chromatography'') is een [[chromatografie|chromatografische]]- methode waarbij de [[stationaire fase]] bestaat uit een dunne laag absorberend materiaal zoals [[silicagel]], [[aluminiumoxide]] of [[cellulose]] op een stevige ondergrond, meestal glas, aluminium of kunststof. De mobiele fase beweegt over de stationaire fase door de capillaire werking soms geholpen door de zwaartekracht of een elektrode potentiaal.
==Materialen==
==Principes van dunne laag chromatografie==
Scheidingen worden verkregen op een plaat gecoat met een dunne laag fijn verdeelde deeltjes. Deze laag noemt men de stationaire fase en kan bestaan uit ''normal phase'' (np) silica of ''reversed phase'' (RP) silica. NP silica heeft [[hydrofiel]]e groepen aan de oppervlakte, en RP silica is gecoat met hydrofobe groepen. De mobiele fase kan in principe ieder loopmiddel zijn dat normaal ook gebruikt wordt in vloeistofchromatografie.
Typisch dunne laag chromatografie is de scheidingen worden verkregen op een glasplaat gecoat met een dunne laag fijn verdeelde deeltjes. Deze laag noemt men de stationaire fase en kan bestaan uit nomale fase silica en omgekeerde fase silica. De mobiele fase kan in principe ieder loopmiddel zijn die normaal ook gebruikt wordt in vloeistof chromatografie. Gebruikelijke maten voor een TLCDLC-plaatje zijn 5x20 cm, 10x20 cm en 20x20 cm. Commerciële plaatjes komen in twee categorieën, conventionele en hoge-kwaliteit. Conventionele plaatjes hebben een laagdikte van 200 tot 250 micrometer en een deeltjesgrootte tot ongeveer 20 micrometer. Hogekwaliteits plaatjes hebben gebruikelijk een laagdikte van 100 micrometer en een deeltjes diameter van 5 micrometer. Hoge-kwaliteits plaatjes hebben als voordeel betere scheidingen in kortere tijd, als nadeel hebben deze type plaatjes dat de monster capaciteitmonstercapaciteit lager is.
TLC is een veelgebruikte techniek in de [[organische chemie]]. Vanwege de eenvoud en snelheid is TLC een veelgebruikte methode om een chemische reactie te volgen. ▼
▲TLCDLC is een veelgebruikte techniek in de [[organische chemie]]. Vanwege de eenvoud en snelheid is TLC een veelgebruikte methode om een chemische reactie te volgen.
==TLC plaat ontwikkeling==
===Ontwikkeling van een DLC-plaatje===
Vlekken op een TLC-plaatje die onder normale omstandigheden niet zichtbaar zijn, zijn vaak wel te behandelen. Deze behandeling kan zowel fysisch als chemisch. Voorbeeld van een fysische behandeling is het zichtbaar maken van spots met behulp van UV-licht. Een voorbeeld van een chemische behandeling is het behandeling met Jood damp. Een aantal TLC "stains" zijn: ▼
*Zoals al genoemd jood; het kleuren van een TLC plaat met behulp van jood damp is de oudste methode voor het zichtbaar maken van bepaalde typen verbindingen. De methode is gebaseerd op het feit dat jood een grote affiniteit heeft met onverzadigde verbindingen. ▼▲Vlekken op een TLCDLC-plaatje die onder normale omstandigheden niet zichtbaar zijn, zijn vaak wel te behandelen. Deze behandeling kan zowel fysisch als chemisch. Voorbeeld van een fysische behandeling is het zichtbaar maken van spots met behulp van UV-licht . Een voorbeeld van een chemische behandeling is het behandeling met Jood damp. Een aantal TLC "stains"kleuringen zijn:
*Ultraviolet licht; de methode werkt goed bij het zichtbaar maken van UV-actieve verbindingen, vooral verbindingen met aromatische ringen. Vergeet niet de spot te omcirkelen met potlood. ▼▲* Zoals al genoemd jood[[Jood]]; het kleuren van een TLC plaatDLC-plaatje met behulp van jood dampjooddamp is de oudste methode voor het zichtbaar maken van bepaalde typen verbindingen. De methode is gebaseerd op het feit dat jood een grote affiniteit heeft met onverzadigde verbindingen.
▲*Ultraviolet licht; de methode werkt goed bij het zichtbaar maken van UV-actieve verbindingen, vooral verbindingen met aromatische ringen. VergeetDe nietvlekken dedie spotzichtbaar tezijn omcirkelenonder UV-licht worden vaak omcirkelt met potlood , om ze onder normaal licht te kunnen terugvinden.
*Cerium(IV)ammonium sulfaat; speciaal ontwikkeld voor het zichtbaar maken van alkaloïden.
*Ceriumsulfaat; algemeen effectief voor alkaloïden.
*IJzerchloride; werkt zeer goed bij het zichtbaar maken van fenolen.
*Morin hydraatMorinhydraat; Algemeen gebruik, is fluorescerend.
*Ninhydrine; zeerveel goede staingebruikt voor amino zuren.aminozuren
*Dinitrofenylhydrazine (DNP); Hoofdzakelijk ontwikkeld voor aldehyden en ketonen; vormt de corresponderende hydrazones, waarna deze oranje kleuren.
*Vanillin; Zeer goede stain, geeft verschillende kleuren voor verschillende typen verbindingen (verschillende fuctionele groepen).
*Kaliumpermanganaat; Deze stain kleurt stoffen met functionele groepen die gevoelig zijn voor oxidatie. Na onderdompelen in de oplossing en na verwarming van het TLC plaatje zullen verschillende typen verbindingen geel opkleuren op een paarse achtergrond. Enkele van deze oxideerbare functionele groepen zijn alcoholen, amines, sulfides, mercaptanen enz.
*Broomkresolgroen; deze kleurstof werkt zeer goed bij functionele groepen met een pKa van ongeveer 5. De stain kan zeer goed selectief onderscheid maken tussen carbonzuren.
*1% zwavelzuur oplossing; selectief voor carbonhydraten.
| 